近日，我校王天云教授團(tuán)隊(duì)在國(guó)際權(quán)威期刊International Journal of Biological Macromolecules上發(fā)表了題為“Effect of CHO cell line constructed with CMAH gene-directed integration on the recombinant protein expression”的研究論文。我校2018級(jí)研究生曹祥祥為該論文第一作者，基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院耿少雷博士和王天云教授為共同通訊作者。研究得到了國(guó)家自然科學(xué)基金、中原科技創(chuàng)新領(lǐng)軍人才及河南省科協(xié)青年托舉人才項(xiàng)目的資助。

該研究揭示了CMAH位點(diǎn)特異性整合顯著提高了CHO細(xì)胞轉(zhuǎn)基因表達(dá)的穩(wěn)定性并改善重組蛋白的糖基化形式，為CHO細(xì)胞系的構(gòu)建提供了新的策略。近70 %獲批上市的重組蛋白藥物是由中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢（CHO）細(xì)胞生產(chǎn)的，但轉(zhuǎn)基因長(zhǎng)期表達(dá)不穩(wěn)定。傳統(tǒng)的CHO細(xì)胞構(gòu)建是基于外源基因隨機(jī)整合到CHO基因組中，該方法工作量大、整合效率和轉(zhuǎn)錄活性低、且轉(zhuǎn)基因沉默程度高，亟需篩選和鑒定CHO細(xì)胞基因組中高效、穩(wěn)定的整合位點(diǎn)，解決生物制藥企業(yè)的實(shí)際需求。該團(tuán)隊(duì)采用CRISPR/Cas9基因編輯技術(shù)，用于對(duì)CHO細(xì)胞基因組中對(duì)乙酰神經(jīng)氨酸羥化酶（CMAH）位點(diǎn)進(jìn)行特異性整合。與隨機(jī)整合相比，在CMAH位點(diǎn)的整合，使得細(xì)胞呈現(xiàn)出更穩(wěn)定的EGFP熒光表達(dá)水平和更低的異質(zhì)性，并且所表達(dá)的促紅細(xì)胞生成素（EPO）中產(chǎn)生了更理想的糖基化形式。本研究結(jié)果首次揭示了轉(zhuǎn)基因在CMAH位點(diǎn)的特異性整合能夠提高轉(zhuǎn)基因表達(dá)的長(zhǎng)期穩(wěn)定性，對(duì)治療性糖蛋白的表達(dá)具有重要意義，為CHO細(xì)胞系的構(gòu)建提供了一條新的途徑。

據(jù)了解，International Journal of Biological Macromolecules屬于中國(guó)科學(xué)院一區(qū)Top期刊，影響因子為7.7。